Introducción
PCR (reacción en cadena de la polimerasa)
es un método revolucionario desarrollado por Kary Mullis en la década de 1980. La PCR se basa en el uso de la capacidad deADN polimerasapara sintetizar una nueva hebra de ADN complementaria a la hebra plantilla ofrecida. Debido a que la ADN polimerasa puede agregar un nucleótido solo a un grupo 3'-OH preexistente, necesita uncebadoral que se le puede añadir el primer nucleótido. Este requisito hace posible delinear una región específica de secuencia de plantilla que el investigador desea amplificar. Al final de la reacción de PCR, la secuencia específica se acumulará en miles de millones de copias (amplicones).
Cómo funciona
 | Componentes de PCRplantilla de ADN- la muestra de ADN que contiene la secuencia diana. Al comienzo de la reacción, se aplica alta temperatura a la molécula original de ADN de doble cadena para separar las cadenas entre sí.ADN polimerasa- un tipo de enzima que sintetiza nuevas hebras de ADN complementarias a la secuencia diana. La primera y más comúnmente utilizada de estas enzimas esTaqADN polimerasa (deBaños acuáticos), mientrasPfuADN polimerasa (dePyrococcus loco) se usa ampliamente debido a su mayor fidelidad al copiar ADN. Aunque estas enzimas son sutilmente diferentes, ambas tienen dos capacidades que las hacen adecuadas para PCR: 1) pueden generar nuevas hebras de ADN utilizando una plantilla de ADN y cebadores, y 2) son resistentes al calor.imprimaciones- fragmentos cortos de ADN monocatenario que son complementarios a la secuencia diana. La polimerasa comienza a sintetizar nuevo ADN desde el final del cebador.Nucleótidos (dNTP o trifosfatos de desoxinucleótidos)- unidades individuales de las bases A, T, G y C, que son esencialmente "bloques de construcción" para nuevas hebras de ADN.RT-PCR(PCR de transcripción inversa) es una PCR precedida por la conversión de la muestra de ARN en ADNc con enzimala transcriptasa inversa.Limitaciones de PCR y RT-PCRLa reacción de PCR comienza a generar copias de la secuencia objetivo de manera exponencial. Solo durante la fase exponencial de la reacción de PCR es posible extrapolar hacia atrás para determinar la cantidad inicial de la secuencia diana contenida en la muestra. Debido a los inhibidores de la reacción de la polimerasa que se encuentran en la muestra, la limitación de los reactivos, la acumulación de moléculas de pirofosfato y la autorelación del producto acumulado, la reacción de PCR finalmente deja de amplificar la secuencia objetivo a una velocidad exponencial y se produce un "efecto de meseta". haciendo que la cuantificación del punto final de los productos de PCR no sea confiable. Este es el atributo de PCR que haceRT-PCR cuantitativa en tiempo realtan necesario |
Consultas de muestra
Recursos
»"Reacción en cadena de la polimerasa" [MAJR]
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FAQs
¿Qué hace la reacción en cadena de la polimerasa PCR? ›
La reacción en cadena de la polimerasa, o PCR, es una técnica de laboratorio utilizada para hacer múltiples copias de un segmento de ADN . La PCR es muy precisa y se puede utilizar para amplificar o copiar un objetivo de ADN específico de una mezcla de moléculas de ADN.
¿Cómo funciona la PCR paso a paso? ›La PCR se basa en tres sencillos pasos necesarios para cualquier reacción de síntesis de ADN: (1) desnaturalización del molde en cadenas sencillas; (2) hibridación de los cebadores con cada hebra original para la síntesis de una nueva hebra; y (3) extensión de las nuevas hebras de ADN de los cebadores .
¿Qué es el método PCR? ›La PCR es una técnica muy sensible que permite la rápida amplificación de un segmento específico de ADN . La PCR genera miles de millones de copias de un fragmento o gen de ADN específico, lo que permite la detección e identificación de secuencias de genes mediante técnicas visuales basadas en el tamaño y la carga.
¿Qué es PCR y su aplicación? ›La PCR implica un ciclo repetitivo de replicación para amplificar pequeños segmentos de ácido desoxirribonucleico (ADN). Una aplicación novedosa de esta técnica es la identificación microbiana en la queratitis infecciosa , una de las principales causas de ceguera en el mundo.
¿Cuál es el objetivo final de la PCR? ›La reacción en cadena de la polimerasa (abreviada PCR) es una técnica de laboratorio para producir (amplificar) rápidamente de millones a miles de millones de copias de un segmento específico de ADN , que luego se puede estudiar con mayor detalle.
¿Qué requiere una PCR exitosa? ›Los ingredientes clave de una reacción de PCR son Taq polimerasa, cebadores, plantilla de ADN y nucleótidos (bloques de construcción de ADN) . Los ingredientes se ensamblan en un tubo, junto con los cofactores que necesita la enzima, y se someten a ciclos repetidos de calentamiento y enfriamiento que permiten sintetizar el ADN.